Po statističnih podatkih WHO je v zadnjih 40 letih zaradi aidsa umrlo 25 milijonov ljudi. Škoda zaradi te okužbe je ogromna. Izkazalo se je, da je večina okuženih v Afriki, od koder je ta okužba prišla. Pri HIV postane diagnoza bolezni še posebej pomembna. Res je, da za HIV še ni zdravil, a zgodnje zdravljenje lahko podaljša bolnikovo življenje in izboljša njegovo kakovost.
Diagnoza okužbe s HIV
Okužba s HIV se določi na različnih stopnjah z naslednjimi metodami:
- ELISA - encimski imunski test.
- Western blot.
- PCR - polimerazna verižna reakcija.
- Hitri testi.
Metodo PCR je razvil ameriški biokemik Kary Mullis, ki je zanjo leta 1983 prejel Nobelovo nagrado. Danes ta metoda v medicini zaradi svoje natančnosti in informacijske vsebine velja za vodilno pri diagnostiki vseh okužb. HIV v tem pogledu ni izjema.
Bistvo analize
Vsaka živa celica vsebuje RNA in DNK. Te nukleinske kisline so sposobne samokopiranja in samoreplikacije. Za vsako okužbo so fragmenti DNK edinstveni. ATv bioloških tekočinah ti fragmenti nukleinskih kislin krožijo. Ujame in prepozna jih posebna oprema - reaktor. To je osnova metode. Laboratorijski asistent prešteje te drobce. Retrovirus HIV se spremlja glede RNA. Tudi z enojnimi kopijami virusnih delcev jih lahko PCR zazna in prešteje.
Venska kri se najpogosteje uporablja kot testna tekočina. Posebne komponente metode se vežejo na virusne delce in jih naredijo zaznavne, ker se najdeni fragmenti pomnožijo.
V primeru virusa HIV je rezultat prisotnosti virusa mogoče dobiti že dolgo pred pojavom klinike. Zato ima PCR zaradi svoje visoke občutljivosti tako visoko diagnostično vrednost. Velik plus PCR je vsestranskost metode. Inkubacijska doba okužbe za PCR ni ovira.
strošek raziskav
PCR metoda je precej draga. To je ena njegovih velikih pomanjkljivosti. Potrebuje najnovejšo opremo in visoko usposobljenega laboratorijskega pomočnika. Glede na navedeno se PCR diagnostika v manjših naseljih ne izvaja. Testirate se lahko samo v specializiranih velikih klinikah.
Stroški testiranja DNK HIV v moskovskih klinikah se začnejo od 2.800 rubljev, virusno obremenitev (virusna RNA v plazmi) se določi s PCR - od 8.800 rubljev, odpornost HIV na zaviralce proteaze pa od 16.500 rubljev. Kot lahko vidite, so cene precej visoke. PCR lahko opravite brezplačno v javnih ambulantah v skladu s politiko MHI. Pomembno,da je postopek mogoče opraviti anonimno. V registru pacient prejme številko, po kateri lahko ugotovi rezultat. V sodobnih zdravstvenih centrih obstajajo osebni računi strank, kamor se ti podatki vnašajo.
raziskovalni cilji
PCR diagnostika za HIV je predpisana v takih primerih:
- Odkrivanje okužbe pri otroku, rojenem bolni materi ali nosilki, za določitev intrauterine okužbe.
- Če je ELISA dala vprašljive rezultate (PCR za HIV pomaga v tem primeru postaviti končno diagnozo).
- Za odkrivanje količinske vsebnosti virusa v telesu.
- S pozitivnim imunoblotom se dopolnjujeta s PCR.
- Testiranje darovalcev.
- Za zgodnjo diagnozo HIV.
- Za določitev učinkovitosti in odpornosti na ART.
Prednost te analize je, da se PCR za HIV lahko izvaja tudi pri otrocih, mlajših od enega leta.
Raziskave se pogosto ne izvajajo za primarno diagnozo, ampak že v procesu zdravljenja. Primarna diagnostika so serološke študije (določijo raven protiteles proti HIV). Če se lažno pozitiven rezultat ponovi, je to morda pri nizki virusni obremenitvi.
PCR diagnosticira HIV, če še ni protiteles proti njemu. Metoda ELISA v tem primeru ne bo dala odgovora.
PCR za HIV bo že pozitiven. Toda simptomi tega obdobja HIV niso specifični. Bolnika najprej dolgotrajno in neuspešno zdravi ARVI pri splošnem zdravniku. Upoštevati je treba, da diagnoza HIV temelji le naPCR se ne izvaja, potrebno je opraviti druge obsežne teste. Metoda PCR je pogosteje pomožna pri težkih primerih.
Priprava na analizo
Pred jemanjem PCR za HIV, 2 dni pred testom, ne smete jesti mastne hrane, alkohola. Prav tako je bolje, da se psihično in fizično ne obremenjujete. Če je bolniku predpisan tečaj imunostimulacije, se ta ustavi 2 tedna pred analizo.
Kri je najbolje vzeti zjutraj. Lahko se pregledajo tudi druge biološke tekočine telesa (sperma, vaginalni izločki), vendar je kri najboljši material. Slina, znoj, urin in solze se ne uporabljajo, saj je vsebnost virusa v njih minimalna.
Plusi PCR za HIV
Prednosti metode so izjemno majhna verjetnost lažno pozitivnega rezultata, univerzalnost reakcije za vse biološke tekočine telesa. Analiza ima širok razpon:
- Eno odvzem krvi se lahko uporabi za odkrivanje različnih okužb.
- Tehnika je nujna, rezultat je pripravljen že naslednji dan.
- Zaupanje je med 85 in 98%.
- Prisotnost HIV je mogoče ugotoviti 10-14 dni po okužbi (trenutno še ni protiteles).
- Brez starostne omejitve, lahko se izvaja takoj od rojstva.
Slabosti metode
Pomanjkljivosti PCR so naslednje:
- Stroški analize.
- Potrebuje prefinjeno medicinsko opremo.
- Potrebuje visoko usposobljenega laboratorijskega asistenta in zdravnika,analiza prejemnika.
- Reakcija je zelo občutljiva, zato je napaka lahko 20%.
- Lahko povzroči lažno pozitiven rezultat, če ima bolnik avtoimunske procese, onkologijo, kronične okužbe.
- Potrebna je posebna čistoča laboratorijskih prostorov, saj lahko virus pride v analizo iz zraka. Potem bo rezultat napačen.
Za laboratorije, ki izvajajo PCR, so za izboljšanje kakovosti diagnostike razvili posebne stroge ukrepe po sistemu SanPiN za notranji nadzor. Poleg tega je treba upoštevati vsa pravila dela s to tehniko:
- Obvezno strogo upoštevati informacije na epruvetah.
- Pred odvzemom krvi poglejte še enkrat in se prepričajte, da je analiza načrtovana.
- Medicinska sestra mora cevi pravilno označiti.
- Laborant mora pravilno izvesti vse manipulacije z biomaterialom, da prepreči navzkrižno kontaminacijo.
- Testni sistem mora biti odlične kakovosti.
Samo če so izpolnjeni vsi ti pogoji, je napaka v odgovoru lahko le približno 2% epizod.
Trajanje analize
Mnoge zanima, kako dolgo bo pripravljen PCR za HIV. Diagnoza ne traja več kot 8 ur. Pacient lahko dobi odgovor že naslednji dan. Hitro testiranje se izvede v 2 urah.
PCR Zanesljivost
Kljub številnim prednostim PCR ne velja za idealno diagnostično metodo. V primeru ga kontaktirajopotrebo po pridobitvi presejalnih testov za prisotnost HIV v telesu.
Kdaj se vzame kri za analizo?
Kako dolgo jemati PCR za HIV? Zanesljiv rezultat je mogoče dobiti že pri odvzemu krvi 4-4 dni po domnevni okužbi. Po 2 tednih bo zanesljivost za HIV 98%, v obdobju 5 dni pa 80%. Prisotnost negativnega rezultata PCR za HIV bo zanesljiva, vendar se za popolnoma natančen rezultat izvede tudi ELISA.
Analiza ELISA bo učinkovita le, če obstajajo protitelesa proti virusu, ta čas lahko traja od 1-3 mesecev do šestih mesecev. Ker ELISA daje večjo verjetnost (98 % -99,9 %), PCR ne moremo imenovati 100 % potrditvenega testa za prisotnost okužbe s HIV. Po drugi strani pa je to edina tehnika, pri kateri vam ni treba čakati na pojav protiteles.
Pri HIV lahko PCR zagotovi informacije o učinkovitosti ART, stadiju bolezni HIV in številu VN (kvantitativna ocena prisotnosti HIV v telesu). To bo govorilo o resnosti in obsegu spremembe.
PCR testiranje na HIV je potrebno tudi, če so v krvi protitelesa, vendar njihova prisotnost ne kaže na klinično zanesljivost okužbe s HIV.
Ne testirajo se le na okužbe in priložnostne spolne odnose. Druge priložnosti:
- Načrtovanje nosečnosti.
- Prihajajoča operacija.
- Priložen seks.
- Nekateri poklici zahtevajo ta test za sprejem na delo (učitelji, zdravniki in drugo medicinsko osebje).
- zaporniki.
- bolniki s TB.
- Uslužbenci ministrstva za izredne razmere in policije.
- Vrnil z dopusta iz eksotičnih držav (če se želite prepričati, da ni okužbe).
- prostitutke.
- tuji študenti.
- Droge.
Prav tako lahko določeni simptomi pri pacientu zahtevajo testiranje na HIV:
- Nenadna izguba teže.
- driska, ki traja več kot 3 tedne
- Dlje časa nerazumna visoka temperatura.
- Otekle bezgavke.
- Nepojasnjen vzrok za pljučnico, kandidozo itd.
Dešifriranje analize je prerogativ lečečega zdravnika, ne laboratorijskega asistenta.
PCR ali ELISA, kaj je bolje?
Ko se s PCR-diagnozo RNA virusa HIV odkrije tako kvalitativno kot kvantitativno. Ta analiza jasno identificira specifičnega patogena, tudi če obstaja več navzkrižno reagirajočih patogenov. Biološki material se lahko uporablja tudi v posušeni obliki. Slaba stran je visoka občutljivost PCR, ko lahko da lažno pozitiven rezultat prisotnost celo majhne količine tuje DNK na instrumentih ali epruveti.
Naloga in možnost ELISA je določiti prisotnost protiteles proti retrovirusu. Čeprav je njegova natančnost 99-odstotna, ni uporabna v zgodnjih fazah.
Kvalitativno testiranje na HIV
Kakovost PCR za HIV določa prisotnost virusa v telesu. Rezultati v tem primeru bodo videti takole: pozitivni, lažno pozitivni, negativni. Toda ta študija ne bo dala informacij o količini retrovirusa. Takšna kvalitativna analizaneprimerno, če je bila okužba s HIV v telesu že odkrita na druge načine.
Učinkovitosti zdravljenja je nemogoče nadzorovati z visokokakovostnim PCR.
kvantifikacija HIV
Izvajajo ga le osebe, okužene s HIV, da bi prešteli število kopij virusne RNA v biološkem izdelku.
Namen takšne študije je spremljanje poteka zdravljenja in ugotavljanje odpornosti virusa nanj. Protivirusne terapije v takšnih izračunih zdravnik ne predpisuje slepo, zato bo učinkovitejša. Kvantitativni PCR za okužbo s HIV se izvaja veliko pogosteje. Ta analiza je prikazana kot kopija/ml krvi.
Katere rezultate je mogoče dati:
- Virusna RNA je odsotna ali je zelo majhna (približno 20 kopij/ml). Ni gotovosti glede diagnoze.
- Od 20 - do 10 do 6. stopnje kopij / ml - diagnoza je zanesljiva.
- Več kot 106 kopij/ml - visoka vrednost VN.
Laboratoriji lahko izvajajo PCR testiranje na HIV v realnem času. To pomeni opazovanje in številčno vrednotenje kopičenja produktov PCR s samodejnim beleženjem rezultatov.
