V zadnjem času je bila razvita zanesljiva, zelo občutljiva in hitra metoda za diagnosticiranje različnih nalezljivih bolezni ljudi. Ta metoda se imenuje "PCR analiza". Kaj je, kaj je njegovo bistvo, katere mikroorganizme lahko razkrije in kako ga pravilno jemati, bomo povedali v našem članku.
zgodovina odkritij
Metodo verižne reakcije s polimerazo (PCR) je izumil ameriški znanstvenik Kary Mullis leta 1983. Sprva je diagnostično metodo patentirala korporacija Cetus, v kateri je delal njen ustvarjalec. Toda leta 1992 so bile vse pravice in patenti prodani Hoffman-La Roche. Po tem se je izkazalo, da so podobne študije izvajali vzporedno in so jih posneli drugi ameriški biologi, kot so Alice Chen, David Edgar, John Trell. Leta 1980 so se s tem problemom ukvarjali tudi sovjetski znanstveniki A. Slyusarenko, A. Kaledin in S. Gorodetsky. Zato ni bilo mogoče določiti edinega imetnika avtorskih pravic. Mnogi ugledni biokemiki so dali določen prispevek k razvoju tehnike polimerazne verižne reakcije in patentirali svoje inovacije. Trenutno je analizaPCR se izvaja povsod v posebej opremljenih laboratorijih.
Bistvo diagnostične metode PCR
PCR analiza: kaj je to in kako deluje? Bistvo metode je povečanje volumna določenega mikrobnega okolja v umetnih pogojih z uporabo posebnega encima DNA polimeraze. Za to se obstoječi material DNK večkrat pomnoži. Tako se bo ob prisotnosti patogenega mikroorganizma v vzorcu njegova količina zaradi biokemičnih laboratorijskih manipulacij povečala, bakterije pa ne bo težko odkriti pod mikroskopom.
Kako poteka raziskava materiala?
Potrebno za analizo:
- DNK matrika;
- primeri, ki povezujejo konce kosa materiala;
- toplotno odporen encim DNA polimeraza;
- kemikalije, zaradi katerih encimi delujejo pravilno;
- puferska raztopina, potrebna za ustvarjanje ustreznih pogojev za rast in razvoj DNK materiala.
Za izvedbo PCR se izvede 25-30 ponovitev, sestavljenih iz treh stopenj: denaturacija, žarjenje in elongacija.
Za analizo polimerne verižne reakcije se uporablja posebna naprava - ojačevalnik. Sodobna oprema vam omogoča nastavitev potrebnega programa za grelne in hladilne cevi za odpravo napak med diagnostiko.
Kje se uporablja diagnostika?
Metoda polimerne verižne reakcije se uporablja na različnih področjih medicine:
- kriminalisti zidentificira genetski material, kot so lasje, slina ali kri;
- PCR krvni test pomaga pri genotipizaciji, na primer pri odkrivanju posamezne genetsko prirojene reakcije na določeno zdravilo;
- uporaba te metode za ugotavljanje prisotnosti družinskih vezi med ljudmi;
- Najbolj priljubljena metoda PCR je postala v medicinski diagnostiki za ugotavljanje različnih nalezljivih bolezni.
Katere okužbe odkrije PCR?
Torej, medicina že dolgo in uspešno uporablja PCR analizo. Kaj je, že vemo. In katere patogene je mogoče odkriti z njim? S PCR metodo se diagnosticirajo naslednje nalezljive bolezni:
- hepatitis A, B, C;
- ureaplazmoza;
- kandidiaza;
- klamidija;
- mikoplazmoza;
- gardnereloza;
- infekcijska mononukleoza;
- trihomonijaza;
- papilomavirusna okužba;
- tuberkuloza;
- herpes tipa 1 in 2;
- helikobakterioza;
- citomegalovirus;
- davica;
- salmoneloza;
- okužba s HIV.
Prav tako se pri diagnozi raka uporabljajo metode PCR.
Prednosti metode
PCR diagnostika ima več prednosti:
- Visoka občutljivost. Tudi v prisotnosti le nekaj molekul DNK mikroorganizma PCR analiza ugotovi prisotnost okužbe. Metoda bo pomagala pri kroničnih in latentno pojavljajočih se boleznih. Pogosto v takih primerih mikroorganizemje sicer neobdelan.
- Za raziskave je primeren kateri koli material, kot so slina, kri, genitalni izločki, lasje, epitelijske celice. Najpogostejša je analiza krvi in urogenitalnega brisa za PCR.
- Dolgotrajni pridelek ni potreben. Samodejni diagnostični postopek vam omogoča, da dobite rezultate študije po 4-5 urah.
- Metoda je skoraj 100% zanesljiva. Zabeleženi so bili le posamezni primeri lažno negativnih rezultatov.
- Zmožnost identifikacije več vrst patogenov iz enega samega vzorca materiala. To ne samo pospeši proces diagnosticiranja bolezni, ampak tudi znatno zmanjša materialne stroške. Pogosto zdravnik predpiše celovito analizo PCR. Cena preiskave, ki je sestavljena iz določitve šestih patogenov, je približno 1.500 rubljev.
Priporočila za pripravo na analizo
Da bi bili rezultati med študijo PCR zanesljivi, morate opraviti test v skladu s priporočili za predhodno pripravo na diagnozo:
- Pred dajanjem sline se vzdržite jesti in jemanja zdravil 4 ure pred vzorčenjem. Neposredno pred posegom sperite usta s kuhano vodo.
- Zgornja pravila je treba upoštevati tudi pri jemanju vzorca z notranje površine lica. Po izpiranju priporočamo, da naredite rahlo masažo kože, da poudarite izločanje žleze.
- Urin se običajno zbira doma. Če želite to narediti, morate opraviti temeljito straniščegenitalije. V sterilno plastično posodo zberite 50-60 ml urina. Da bi zagotovili čistost materiala, je ženskam priporočljivo vstaviti tampon v nožnico, moškim pa čim bolj potegniti kožno gubo nazaj. Ne darujte med menstruacijo.
- Za darovanje sperme se morate vzdržati spolnih odnosov 3 dni pred vzorčenjem. Zdravniki odsvetujejo tudi obisk savne in vročo kopel, pitje alkohola in začinjene hrane. 3 ure pred testom se morate vzdržati uriniranja.
- Za odvzem urogenitalnega brisa, na primer, če se opravi PCR test za klamidijo, ženskam in moškim svetujemo, da imajo spolni počitek 3 dni. Antibakterijskih zdravil ne smete jemati 2 tedna pred analizo. Za en teden morate prenehati uporabljati intimne gele, mazila, vaginalne supozitorije, izpiranje. 3 ure pred pregledom se morate vzdržati uriniranja. Med menstruacijo se vzorčenje ne izvaja, le 3 dni po prenehanju krvnega odvajanja lahko vzamete urogenitalni bris.
PCR med nosečnostjo
V obdobju pričakovanja otroka so številne spolno prenosljive okužbe izjemno nevarne za normalen razvoj ploda. Spolno prenosljive bolezni lahko izzovejo intrauterino zaostajanje v rasti, spontani splav ali prezgodnji porod, prirojene malformacije otroka. Zato je izredno pomembno opraviti PCR preiskavo v zgodnji nosečnosti. Ob registraciji je potrebno opraviti analizo - do 12 tednov.
Materijal se vzame iz cervikalnega kanala s posebno krtačo. Postopek je neboleč in ne predstavlja nevarnosti za otroka. Običajno se med nosečnostjo opravi analiza za klamidijo s PCR metodo, pa tudi za ureaplazmozo, mikoplazmozo, citomegalovirus, herpes, papilomavirus. Takšen kompleks preiskav se imenuje PCR-6.
PCR za diagnozo HIV
Zaradi dejstva, da je metoda verižne reakcije s polimerazo zelo občutljiva na spremembe v telesu in na pogoje diagnoze, lahko na rezultat vpliva veliko dejavnikov. Zato analiza PCR za okužbo s HIV ni zanesljiva metoda, njena učinkovitost je 96–98%. V preostalih 2-4% primerov test daje lažno pozitivne rezultate.
Toda v nekaterih situacijah je diagnostika HIV PCR nepogrešljiva. Običajno se daje ljudem z lažno negativnim rezultatom ELISA. Takšni kazalniki kažejo, da oseba še ni razvila protiteles proti virusu in jih ni mogoče odkriti brez večkratnega povečanja števila. Točno to je mogoče doseči z izvedbo PCR krvnega testa.
Ta diagnostika je potrebna tudi za otroke prvega leta življenja, rojene od HIV pozitivne matere. Metoda je edini način za zanesljivo določitev statusa otroka.
PCR za diagnosticiranje hepatitisa
Metoda verižne reakcije s polimerazo omogoča odkrivanje DNK virusa hepatitisa A, B, C veliko pred nastankom protiteles proti okužbi ali pojavom simptomov bolezni. PCR analiza za hepatitis C je še posebej učinkovita, saj je v 85% primerov ta bolezen asimptomatska in brezpravočasno zdravljenje preide v kronično stopnjo.
Pravočasno odkrivanje patogena bo pomagalo preprečiti zaplete in dolgotrajno zdravljenje.
Celovit PCR pregled
Kompleksna PCR analiza: kaj je to? Gre za preiskavo z metodo polimerne verižne reakcije, ki vključuje določanje več vrst okužb hkrati: mikoplazma genitalium, mikoplazma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, citomegalovirus, ureaplasma urealiticum, herpes gonorrhes tipa 1 in 2, herpes gonorrhes tipa 1 in 2. Cena takšne diagnostike se giblje od 2000 do 3500 rubljev. odvisno od klinike, uporabljenih materialov in opreme, pa tudi od vrste analize: kvalitativne ali kvantitativne. Kaj je v vašem primeru potrebno - odloči zdravnik. V nekaterih primerih je dovolj samo ugotoviti prisotnost patogena, v drugih, na primer z okužbo s HIV, igra kvantitativni titer pomembno vlogo. Pri diagnosticiranju vseh zgoraj navedenih patogenov se preiskava imenuje "analiza PCR-12".
Prepis rezultatov analize
Dešifriranje PCR analize ni težko. Obstajata samo 2 lestvici indikatorja - "pozitiven rezultat" in "negativen rezultat". Ko se odkrije patogen, lahko zdravniki z 99-odstotno gotovostjo potrdijo prisotnost bolezni in začnejo zdraviti bolnika. Pri kvantitativni metodi za določanje okužbe bo ustrezen stolpec navedel številčni indikator odkritih bakterij. Le zdravnik lahko ugotovi obseg bolezni in predpiše potrebno zdravljenje.
V nekaterih primerih, na primer pri določanju okužbe s HIV s PCR, z negativnim rezultatom, postane potrebno opraviti dodatne preiskave za potrditev dobljenih kazalnikov.
Kje se testirati?
Kje opraviti PCR test: v javni kliniki ali v zasebnem laboratoriju? Žal so v občinskih zdravstvenih ustanovah oprema in metode pogosto zastarele. Zato je bolje dati prednost zasebnim laboratorijem s sodobno opremo in visoko usposobljenim osebjem. Poleg tega boste v zasebni kliniki dobili rezultate veliko hitreje.
V Moskvi številni zasebni laboratoriji ponujajo PCR analizo za različne okužbe. Na primer, v klinikah, kot so Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro, se izvaja PCR analiza. Cena pregleda je od 200 rubljev. za identifikacijo enega patogena.
Lahko sklepamo, da je diagnoza nalezljivih bolezni s PCR v večini primerov hiter in zanesljiv način za odkrivanje povzročitelja v telesu v zgodnjih fazah okužbe. A vseeno je v določenih primerih vredno izbrati druge diagnostične metode. Samo specialist lahko ugotovi potrebo po takšni študiji. Dešifriranje PCR analize zahteva tudi profesionalen pristop. Upoštevajte nasvet svojega zdravnika in ne opravljajte preiskav, ki jih ne potrebujete.
