Kolorimetrična metoda - analiza, ki temelji na primerjavi barvne nasičenosti preiskovanih in znanih snovi. Rezultati fizikalnih in kemičnih testov so zelo pomembni za številne veje znanosti, predvsem pa se raziskave uporabljajo v medicini.
Bistvo kolorimetrične metode
Obstaja veliko vrst testov, ki določajo kemično sestavo snovi. Nekateri od njih so univerzalni in se pogosto uporabljajo na različnih področjih, drugi so specifični, z večjo natančnostjo. Kolorimetrična metoda je univerzalna.
Bistvo analize je v tem, da se barvna nasičenost raztopine z neznano koncentracijo primerja z barvo standardne raztopine. Med analizo se kot posledica interakcije preiskovane komponente z določenim reagentom tvori obarvana spojina. Po zaključku reakcije se nastali odtenek primerja z barvo raztopin, katerih koncentracija je že znana.
Menijo, da je ustanovitelj kolorimetrije Robert Boyle. Uporabil je stiskanjetanini za razlikovanje železa od bakra v raztopini. Boyle je opazil, da večja kot je koncentracija železa v raztopini, bogatejši je ton slednjega.
Kolorimetrija
Kolorimetrija je metoda za določanje količine snovi v raztopinah. Analiza temelji na Bouguer-Lambert-Beerjevem zakonu: ko svetlobni žarek zadene gosto vpojno plast snovi, njegova intenzivnost oslabi.
Kolorimetrična metoda za določanje koncentracije snovi lahko uporablja vizualno primerjavo ali primerjavo s posebnimi instrumenti za merjenje intenzivnosti barve. Primerjava je narejena na neposreden in kompenzacijski način.
- Naravno. Metoda vključuje primerjavo barvne ravni preskusne raztopine pri določeni gostoti in temperaturi tekočine z referenčno raztopino. Pri uporabi fotokolorimetrov in spektrofotometrov se kot referenčna raztopina uporablja destilirana voda. Naprave merijo jakost toka, ki je odvisna od jakosti svetlobe.
- Kompenzacijski. Metoda temelji na približevanju barve preučevanega vzorca na referenčno. Rezultat je dosežen z dodajanjem topila ali povečanjem višine plasti obarvanega medija.
Uporaba spektrofotometra, monokromatorja in drugih natančnih instrumentov dodatno poenostavi že tako preprosto metodo raziskovanja in vam omogoča, da povečate natančnost rezultatov. Te naprave lahko merijo količino prepustnosti svetlobe in določijo valovno dolžino.
Kje se uporablja analiza
Kolorimetrična metoda analize se uporablja, če je znana natančna kemična sestava, obstaja referenčni vzorec za primerjavo in je temperatura preskusnega in referenčnega vzorca enaka. Če morate hitro določiti količino obarvane snovi, vendar je tako majhna, da je nemogoče uporabiti analitično metodo.
Kolorimetrija se pogosto uporablja v medicini za klinične biokemične raziskave in druga področja:
- farmacevtska industrija;
- živilska in alkoholna industrija;
- agronomija (določanje kakovosti tal).
Prednosti in slabosti
Kolorimetrična metoda, tako kot vsaka druga, ima prednosti in slabosti.
Prednosti vključujejo naslednje:
- enostavna analiza, minimalni pripravljalni postopki;
- možnost testiranja tudi z majhno količino testnega materiala;
- draga oprema ni potrebna, čeprav se zadnje čase vse pogosteje uporabljajo sodobne naprave, ki niso poceni. Vendar zagotavljajo najbolj natančen rezultat.
Slabosti: nizka natančnost analize v primerjavi z analiznimi metodami.
Biuretna metoda za določanje beljakovin
Beljakovine v krvnem serumu so indikator, ki odraža stanje homeostaze. Povečanje koncentracije makromolekularne spojine v krvi se imenuje hiperproteinemija, nizka vsebnost pa hipoproteinemija.
Proteini vkrvni serum ima drugačno sestavo, strukturo, lastnosti, opravlja različne funkcije. Delimo jih na encime, hormone, imunoglobuline in druge. Vse skupine beljakovin imajo številne skupne značilnosti, na podlagi katerih so bile razvite metode za določanje makromolekularnih organskih spojin v bioloških tekočinah.
Od vseh metod v klinični biokemiji se najpogosteje uporabljajo kolorimetrične metode za določanje beljakovin. So relativno poceni, kar je pomembno za proračunske organizacije. in so precej preprosti. Najpogostejša je biuretna metoda. Bistvo metode: beljakovine v alkalnem okolju reagirajo z bakrovim sulfatom in tvorijo vijolične spojine. Vsebnost beljakovin v krvi je določena z nasičenostjo obarvanja. Biomaterial za analizo se vzame zjutraj na prazen želodec.
Analiza je zelo natančna, vendar obstajajo dejavniki, ki vplivajo na koncentracijo beljakovin v krvi:
- fizična aktivnost tik pred vzorčenjem biomateriala;
- zadnji tedni nosečnosti in dojenja;
- uporaba zdravil Corticotropin, Miscleron, Clofibrate poveča vsebnost beljakovin v krvi, uporaba pirazinamida in estrogena - za zmanjšanje koncentracije;
- napačen položaj roke med vzorčenjem biomateriala.
Določanje železa
Količina železa v krvi je eden glavnih kazalcev pri diagnostiki različnih bolezni. Snov je koncentrirana v hemoglobinu, ki zagotavlja transport kisika v tkiva. Zadoločanje železa s kolorimetrično metodo, najpogosteje se kot glavni reagent uporablja raztopina batofenantrolina (0,02%). Biomaterial - serum brez sledi hemolize.
Bistvo metode: interakcija železovih ionov in sulfatiranega batofenantrolina tvori obarvan kompleks, katerega nasičenost se določi fotometrično. Za pridobitev jasne raztopine je treba upoštevati pravila za vzorčenje biomateriala, vendar za natančno določitev optične gostote kompleksov železo-ligand se železo sprosti iz hemoglobina z uporabo hidroksilamina in detergentov (natrijev dodecil sulfat). Rezultat testa določa prisotnost in stopnjo patologije. Normalna koncentracija železa mora biti:
- 14, 2 – 26,0 µmol/L (moški);
- 10, 6-21, 7 µmol/L (ženske).
Pomanjkanje železa je običajno povezano z izgubo krvi, neustreznim vnosom s hrano ali slabo absorpcijo iz prebavil.
test holesterola
Holesterol je organska snov, ki jo najdemo v celični steni mnogih organizmov, vključno z ljudmi. Potreben je za proizvodnjo holekalciferola in steroidnih hormonov. Raven holesterola 3,37-5,2 mmol/L velja za normalno. Povišana vsebnost je eden od glavnih vzrokov za aterosklerozo.
Kolorimetrične metode za določanje holesterola omogočajo prepoznavanje žilnih bolezni v zgodnji fazi. Glede na patoanatomske rezultate pri smrtnem izidu ishemije je koncentracija lipofilnega alkohola pri bolnikihje bil 6,5-7,8 mmol/L.
Načelo kolorimetrične metode je, da holesterol oksidira 3beta-hidroksi-steroid oksidoreduktaza, pri čemer se sprošča vodikov peroksid, ki pretvori p-aminoatipirin v obarvano spojino. Vsebnost holesterola je določena z nasičenostjo njegove barve.
Pri izvajanju testa pri otroku je treba upoštevati, da koncentracija holesterola v otroštvu ne sme presegati 4,1 mmol/l.
Kaj je encimska kolorimetrična metoda?
Encimski testi temeljijo na uporabi reakcij z encimi z visoko aktivnostjo. V analitični kemiji se pogosto uporabljajo za določanje različnih snovi – od nitratnih ionov do makromolekul.
Encimske (encimske) metode so specifične, ki omogočajo analizo določenih snovi v prisotnosti drugih snovi, podobnih po sestavi. Najpogostejše metode temeljijo na uporabi encima - glukozne oksidaze. Test se uporablja za določanje koncentracije glukoze v krvi. Natančnost testa omogoča, da se uporablja za prilagajanje odmerka hipoglikemičnih zdravil pri bolnikih s sladkorno boleznijo tipa 2.
Metoda oksidanta glukoze velja za eno najboljših kvantitativnih metod za določanje glukoze. Kot biomaterial se lahko uporabljata tako kri (kapilara) kot serum, vendar je bolj zaželena plazma, ker ima nižjo vsebnost hematokrita, kar negativno vpliva na točnost rezultata.
Uporablja se predvsem kinetična metoda fotometrije. Njegovo bistvo je v tem, daugotovljeno razmerje glukoza oksidaza in peroksidaza, bo za določen čas po začetku reakcije hitrost tvorbe obarvane spojine sorazmerna z nivojem glukoze v vzorcu. Glavna prednost testa je, da na rezultat ne vpliva prisotnost spojin tretjih oseb v vzorcu. Metoda ima tudi pomanjkljivost - za testiranje so potrebni dragi merilni instrumenti nemških ali švedskih proizvajalcev.
Sklep
Kolorimetrična metoda je natančna in enostavna za uporabo. Njegova uporaba v medicini omogoča zgodnje odkrivanje različnih patoloških sprememb v telesu. Z uvajanjem novih tehnologij se metoda izboljšuje in postaja vse bolj priljubljena.
