Laboratorijska diagnostika skoraj vseh nalezljivih bolezni temelji na odkrivanju protiteles v pacientovi krvi, ki nastanejo proti antigenom povzročitelja, z metodami seroloških reakcij. V medicinsko prakso so vstopili od poznega devetnajstega do začetka dvajsetega stoletja.
Razvoj znanosti je pomagal določiti antigensko strukturo mikrobov in kemične formule njihovih toksinov. To je omogočilo ustvarjanje ne le terapevtskih, temveč tudi diagnostičnih serumov. Dobimo jih z dajanjem oslabljenih patogenov laboratorijskim živalim. Po več dneh izpostavljenosti se kri kuncev ali miši uporabi za pripravo pripravkov, ki se uporabljajo za identifikacijo mikrobov ali njihovih toksinov s serološkimi testi.
Zunanja manifestacija takšne reakcije je odvisna od pogojev njene postavitve in od stanja antigenov v pacientovi krvi. Če so mikrobni delci netopni, se v serumu oborijo, lizirajo, vežejo ali imobilizirajo. Če so antigeni topni, se pojavi pojav nevtralizacije ali precipitacije.
reakcija aglutinacije (RA)
Test serološke aglutinacije je zelo specifičen. Je enostaven za izvedbo in precejvizualno, za hitro ugotavljanje prisotnosti antigenov v bolnikovem krvnem serumu. Uporablja se za testiranje Vidalove reakcije (diagnoza tifusa in paratifusa) in Weiglove (tifusne mrzlice).
Temelji na specifični interakciji med človeškimi protitelesi (ali aglutinini) in mikrobnimi celicami (aglutenogeni). Po njihovi interakciji nastanejo delci, ki se oborijo. To je pozitiven znak. Za vzpostavitev reakcije je mogoče uporabiti žive ali uničene mikrobne povzročitelje, glive, protozoe, krvne celice in somatske celice.
Kemično je reakcija razdeljena na dva koraka:
- Specifična povezava protiteles (AT) z antigeni (AG).
- Nespecifično - obarjanje konglomeratov AG-AT, to je tvorba aglutinata.
Indirektna reakcija aglutinacije (IPHA)
Ta reakcija je bolj občutljiva kot prejšnja. Uporablja se za diagnosticiranje bolezni, ki jih povzročajo bakterije, znotrajcelični paraziti in protozoji. Je tako specifična, da je mogoče zaznati tudi zelo nizke koncentracije protiteles.
Za njegovo proizvodnjo se uporabljajo prečiščeni ovčji eritrociti in človeške rdeče krvne celice, predhodno obdelane s protitelesi ali antigeni (odvisno od tega, kaj laboratorijski tehnik želi najti). V nekaterih primerih se človeške rdeče krvne celice zdravijo z imunoglobulini. Za serološke reakcije eritrocitov se šteje, da so se zgodile, če so se usedle na dno epruvete. Glede pozitivne reakcijerecimo, ko so celice razporejene v obliki obrnjenega dežnika, ki zaseda celotno dno. Negativna reakcija se šteje, če so se eritrociti usedli v stolpec ali v obliki gumba na sredini dna.
Reakcija padavin (RP)
Serološke reakcije te vrste se uporabljajo za odkrivanje izjemno majhnih delcev antigenov. To so lahko na primer beljakovine (ali njihovi deli), spojine beljakovin z lipidi ali ogljikovi hidrati, deli bakterij, njihovi toksini.
Serume za reakcijo dobimo z umetno okužbo živali, običajno kuncev. S to metodo lahko dobite popolnoma kateri koli precipitacijski serum. Nastavitev seroloških reakcij precipitacije je po mehanizmu delovanja podobna reakcijam aglutinacije. Protitelesa, ki jih vsebuje serum, se združijo z antigeni v koloidni raztopini in tvorijo velike beljakovinske molekule, ki se odložijo na dno epruvete ali na substrat (gel). Ta metoda velja za zelo specifično in lahko zazna celo zanemarljive količine snovi.
Uporablja se za diagnosticiranje kuge, tularemije, antraksa, meningitisa in drugih bolezni. Poleg tega je vključen v forenzični zdravniški pregled.
reakcija obarjanja gela
Serološke reakcije se lahko izvajajo ne samo v tekočem mediju, ampak tudi v agar gelu. To se imenuje metoda razpršene padavine. Z njegovo pomočjo se preučuje sestava kompleksnih antigenskih mešanic. Ta metoda temelji na kemotaksiji antigenov na protitelesa in obratno. V gelu se premikajodrug proti drugemu z različnimi hitrostmi in, se srečajo, tvorijo padavine. Vsaka vrstica je en niz AG-AT.
reakcija nevtralizacije eksotoksina z antitoksinom (PH)
Antitoksični serumi lahko nevtralizirajo delovanje eksotoksina, ki ga proizvajajo mikroorganizmi. Te serološke reakcije temeljijo na tem. Mikrobiologija uporablja to metodo za titriranje serumov, toksinov in toksoidov ter ugotavljanje njihove terapevtske aktivnosti. Moč nevtralizacije toksinov določajo običajne enote - AE.
Poleg tega je zahvaljujoč tej reakciji mogoče določiti vrsto ali vrsto eksotoksina. Uporablja se pri diagnozi tetanusa, davice, botulizma. Študija se lahko izvede tako "na steklu" kot v gelu.
reakcija lize (RL)
Imunski serum, ki vstopi v pacientovo telo, ima poleg svoje glavne funkcije pasivne imunosti tudi lizirajoče lastnosti. Sposoben je raztopiti mikrobna sredstva, celične tuje elemente in viruse, ki vstopijo v pacientovo telo. Glede na specifičnost protiteles, vključenih v serum, so izolirani bakteriolizini, citolizini, spirohetolizini, hemolizini in drugi.
Ta specifična protitelesa se imenujejo "komplement". Najdemo ga v skoraj vseh človeških telesnih tekočinah, ima kompleksno strukturo beljakovin in je izjemno občutljiv na dvig temperature, tresenje, kisline in neposredno sončno svetlobo. Toda v posušenem stanju se lahko obdržinjegove lizirajoče lastnosti do šest mesecev.
Obstajajo te vrste seroloških reakcij te vrste:
- bakterioliza;
- hemoliza.
Bakterioliza se izvaja z uporabo bolnikovega krvnega seruma in specifičnega imunskega seruma z živimi mikrobi. Če je v krvi prisotno dovolj komplementa, bo raziskovalec videl, kako se bakterije lizirajo, reakcija pa se bo štela za pozitivno.
Druga serološka reakcija krvi je, da se suspenzija bolnikovih rdečih krvnih celic zdravi s serumom, ki vsebuje hemolizine, ki se aktivirajo le ob prisotnosti določenega komplimenta. Če obstaja, potem laboratorijski asistent opazuje raztapljanje rdečih krvnih celic. Ta reakcija se v sodobni medicini pogosto uporablja za določanje titra komplementa (to je njegove najmanjše količine, ki izzove lizo eritrocitov) v krvnem serumu in za izvedbo analize za fiksacijo komplementa. Na ta način se izvaja serološki test na sifilis - Wassermanova reakcija.
Reakcija fiksacije komplementa (CFR)
Ta reakcija se uporablja za odkrivanje protiteles proti povzročitelju okužbe v pacientovem krvnem serumu, pa tudi za identifikacijo patogena po njegovi antigenski strukturi.
Do te točke smo opisali preproste serološke reakcije. RSK velja za kompleksno reakcijo, saj v njej ne sodelujeta dva, ampak trije elementi: protitelo, antigen in komplement. Njegovo bistvo je v dejstvu, da je interakcija med protitelesom in antigenomse pojavi le v prisotnosti proteinov komplementa, ki se adsorbirajo na površini oblikovanega kompleksa AG-AT.
Sami antigeni po dodajanju komplementa doživijo pomembne spremembe, kar kaže na kakovost reakcije. Lahko je liza, hemoliza, imobilizacija, baktericidno ali bakteriostatsko delovanje.
Reakcija se pojavi v dveh fazah:
- Tvorba kompleksa antigen-protitelo, ki preiskovalcu ni vidno.
- Sprememba antigena pod delovanjem komplementa. To fazo je najpogosteje mogoče zaslediti s prostim očesom. Če reakcija ni vidna, se za identifikacijo sprememb uporabi dodatni indikatorski sistem.
Indikatorski sistem
Ta reakcija temelji na fiksaciji komplementa. Očiščene ovnove eritrocite in hemolitični serum brez komplementa dodamo v epruveto uro po nastavitvi RSC. Če v epruveti ostane nevezan komplement, se bo pridružil kompleksu AG-AT, ki nastane med ovčjimi krvnimi celicami in hemolizinom, ter povzročil njihovo raztapljanje. To bo pomenilo, da je RSK negativen. Če so eritrociti ostali nedotaknjeni, je torej reakcija pozitivna.
test hemaglutinacije (RGA)
Obstajata dve bistveno različni reakciji hemaglutinacije. Eden od njih je serološki, uporablja se za določanje krvnih skupin. V tem primeru rdeče krvne celice sodelujejo s protitelesi.
In drugoreakcija ne velja za serološke, saj rdeče krvne celice reagirajo s hemaglutinini, ki jih proizvajajo virusi. Ker vsak patogen deluje samo na specifične eritrocite (piščanec, jagnjetina, opica), lahko to reakcijo štejemo za zelo specifično.
Po lokaciji krvnih celic na dnu epruvete lahko ugotovite, ali je reakcija pozitivna ali negativna. Če njihov vzorec spominja na obrnjen dežnik, je želeni virus prisoten v pacientovi krvi. In če so se vsi eritrociti oblikovali kot stolpec kovanca, potem ni želenih patogenov.
Test zaviranja hemaglutinacije (HITA)
To je zelo specifična reakcija, ki vam omogoča določitev vrste, vrste virusov ali prisotnosti specifičnih protiteles v bolnikovem krvnem serumu.
Njegovo bistvo je v tem, da protitelesa, dodana v epruveto s testnim materialom, preprečujejo odlaganje antigenov na eritrocitih in s tem ustavijo hemaglutinacijo. To je kvalitativni znak prisotnosti v krvi specifičnih antigenov za določen virus, ki ga iščete.
Imunofluorescenčna reakcija (RIF)
Reakcija temelji na sposobnosti odkrivanja kompleksov AG-AT s fluorescentno mikroskopijo po obdelavi s fluorokromnimi barvili. Ta metoda je enostavna za uporabo, ne zahteva izolacije čiste kulture in traja malo časa. Nepogrešljiv je za hitro diagnosticiranje nalezljivih bolezni.
V praksi so te serološke reakcije razdeljene na dve vrsti: neposredne in posredne.
Neposredni RIF je izdelan izantigena, ki je predhodno obdelan s fluorescentnim serumom. In posredna je, da se zdravilo najprej zdravi z običajnim diagnostikom, ki vsebuje antigene za protitelesa, ki nas zanimajo, nato pa se ponovno nanese luminiscentni serum, ki je specifičen za beljakovine kompleksa AG-AT, in mikrobne celice postanejo vidni pod mikroskopom.
